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反相液相色譜柱如何選擇緩沖液PH值

更新時間:2019-10-29 點擊次數(shù):1677
反相液相色譜柱中緩沖體系PH值的選擇在反相液相色譜分析中,選擇正確的緩沖液PH值,對可離解的化合物分析的重現(xiàn)性十分重要,不恰當?shù)腜H值可能導致不對稱峰,寬峰,分裂峰或肩峰,而尖銳的,對稱的峰是定量分析中獲得低的檢測限以,兩次分析之間較低的相對標準偏差(RSD)和保留時間的高重現(xiàn)性的前提。
 
反相液相色譜柱如何選擇緩沖液PH值
在選擇緩沖液PH值之前,應先了解被分析物的Pka,高于或低于Pka兩個PH值單位的,有助于獲得好的、尖銳的峰,從HH公式:PH=Pka+log([A-]/[A])得知,溶液 PH值高于或低于Pka兩個單位,化合物中99%以一種形式存在,而一種形式存在的化合物才能獲得好的尖銳的峰。
 
如果選擇不到合適的,樣品的pKa與流動相的pH非常接近,那么流動相pH微小的變化,都會引起樣品保留時間較大的變動。
 
當化合物只有氨基時,緩沖體系的選擇十分簡單,大多數(shù)氨基化合物在PH值小于9時都被質子化,所以所有PH值在7或更低的溶液均適合應用,你也許會問水的 PH值大約是7,為什么還用緩沖鹽,因為緩沖鹽有助于增加方法的可靠性,以及色譜峰的尖銳性,PH值的降低有助于氨基化合物保留的減弱,減小化合物與硅膠表面硅羥基的作用,而使峰更尖銳,任何緩沖液均可應用于氨基化合物的分析,但我們認為PH值等于3的磷酸鉀鹽適合用于氨基化合物的分析。
 
在上面兩個例子中,PH=3的磷酸鉀鹽都能獲得良好的應用,在一般情況下,它是含羧基和氨基化合物分析中的緩沖液,并且我們認為在氨基化合物分析中鉀鹽比鈉鹽更好。

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